件。设计上采用正交组合和单因子梯度两套方法,正交设计用来筛选主要因素,单因子梯度用来确认每个因素的有效范围。”
“低氧、高湿、贴壁培养,葡萄糖、钙盐、镁盐和微量元素分别做增量、减量与缺失对照,碳氮比排四档,氧分压从接近饱和压一路降到最低生存门槛。”
他把十四组条件并排展开。
“每组做平行三管,另外设置不接种的空白对照,排除培养基本身发生浑浊、沉淀或化学变化。”
“还设置培养基批次对照、操作台面抹样、手套压样和环境沉降样。前六组,菌落形成单位,也就是CFU,平板计数显示活菌数不涨,部分组还持续下降。从第七组开始,活菌数出现连续增长,计数曲线才有了真正的上升段。”
“每三十分钟翻一茬,指的是什么?”
“那是显微计数和荧光活性读数的早期变化,不能直接等同于完整倍增时间。”
孙汉章点了点屏幕。
“正规的生长曲线要分延滞期、对数期和稳定期。我们先看到延滞期缩短,再进入对数期,菌体数量快速增加。根据对数期斜率计算比生长速率,再用ln2除以比生长速率得到倍增时间。”
“.....三十分钟是观察窗口里出现的近似翻倍趋势,最后还要以CFU平板计数复核。”
江承连忙把“倍增时间、比生长速率、CFU平板计数”圈了起来。
“确认它存活以后,我没急着高兴。”
孙汉章继续往下翻,“我又连续传了三代。每一代都做菌落计数,记录菌落直径、边缘形态、贴壁程度、细胞排列和代谢信号。”
“三代之间的生长曲线稳定,形态稳定,污染筛查合格,才能认定它在这个条件下扎住了根。杂菌往往会在多个条件里随机出现,形态也会随着培养基改变而漂移,它却对环境有明确偏好,落在合适区间以后能持续维持。”
“温度呢?”
“温度梯度四档,范围围绕初代培养观察到的适宜区间设置。”
“....pH做缓冲体系,略偏碱一点,不能只看培养基起始值,还要测培养过程中pH漂移。渗透压也要控制,过低会造成细胞破裂,过高会抑制代谢。碳氮比决定能量和合成底物的分配,接种密度则故意铺得稀,让每个菌落拥有清晰边界。”
孙汉章放大显微图。
“看这里,边缘整齐,细胞排列紧密,细胞质内看不到明显空泡,也找不到坏死堆。每个细节都要留档,这些细处,就是它存活下来的脚注。”
江承盯着十四组数据,轻声问:
“那要是十四组都没存活呢?”
“那就得换换方法。”孙汉章一点也不急,“医学这行最不缺绕路。今儿试不活,明儿换一组条件再来。条件试完了,还有别的路。试验目标没存活,换法子再来就是。真要怕,怕的是试都没试就收手。”
孙汉章露出一点笑意。
“不过,结论已经可以肯定....在特定环境下,这东西能够自我修复!”